T4 DNA Ligase T4原理载体及其他
T4 DNA Ligase 是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表后分离纯化而来的。它催化相邻DNA链的的5’-磷酸末端和3’羟基末端以磷酸二酯键结合反应。该酶催化平滑末端或粘性末端DNA的连接，修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交中的单链中的单链切口。T4 DNA Ligase T4原理载体及其他
T4 DNA Ligase
T4 DNA Ligase T4原理载体及其他
目录号：42017
试剂盒组成、包装：
组成 | 50U(42017-50) | 100U(42017-100) | 300U(42017-300) |
T4 DNA ligase | 50U | 100U | 300U |
10 ´ Ligation Buffer | 40ml | 80ml | 120ml |
浓度： 5U/ml
储运温度：-20℃（保存6个月）
制品说明：T4 DNA Ligase 是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表后分离纯化而来的。它催化相邻DNA链的的5’-磷酸末端和3’羟基末端以磷酸二酯键结合反应。该酶催化平滑末端或粘性末端DNA的连接，修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交中的单链中的单链切口。
适用范围：（1）DNA片段和载体DNA快速连接；
（2）限制酶切片段的克隆；
（3）将DNA片段与Linker或Adaptor连接。
酶贮存缓冲液：
20mM Tris-HCl (pH7.5)， 0.1 mM EDTA， 1mM DTT， 50 mM KCl， 50% glycerol。
10×Ligation Buffer：
400 mM Tris-HCl， 100 mM MgCl2， 100 mM DTT，5 mM ATP(PH7.8)，其他成分。
建议连接反应体系： (以 10 μl 反应体系为例)
标准反应管 | 阳性对照管 | |
Vector | ml | ml |
PCR产物 | n ml ** | / |
对照插入DNA片段 | / | 1ml |
T4 DNA连接酶(5U/ml) | 2～5U | 2～5U |
10×Ligation Buffer | 1ml | 1ml |
加去离子水至终体积 | 10ml | 10ml |
反应循环的设置：
粘端连接：22oC反应10分钟(可根据需要延长到1小时)；也可以16oC反应1-5小时。
平端连接：22oC反应2小时或16 oC过夜。
T4 DNA Ligase T4原理载体及其他
