2 x SYBR Green qPCR Mix 荧光定量
2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX) 是SYBR Green I 嵌合染料法专用的qPCR试剂，为2x 预混液，包含除引物和DNA样品以外的所有qPCR组分，可减少操作步骤，缩短加样时间，降低污染几率。2 x SYBR Green qPCR Mix 荧光定量
2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX)
2 x SYBR Green qPCR Mix 荧光定量
目录号:71611
产品内容
Components | 71611-500 500rxns(20μl/rxn) | 71611-2500 2500rxns(20μl/rxn) |
2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX) | 1.25 ml x4 | 1.25 ml x20 |
RNase-Free H2O | 5 ml | 5 ml x5 |
保存条件
-20℃保存，有效期 24 个月。使用前，充分融解，轻轻颠倒混匀，短期使用可放在 4 ℃，避免反复冻融。
产品简介
2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX) 是SYBR Green I 嵌合染料法专用的qPCR试剂，为2x 预混液，包含除引物和DNA样品以外的所有qPCR组分，可减少操作步骤，缩短加样时间，降低污染几率。其核心组分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶，配合精心优化的Buffer体系，有效抑制非特异性扩增，可对宽广浓度范围的模板进行准确定量，获得稳定可靠的qPCR结果，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。
预混液中已加入高浓度的ROX参比染料，适用于ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT and 7900HT Fast,ABI Step One, ABI Step One Plus以及其它需要高浓度ROX机型。
操作步骤：
1. 将DNA模板、引物、2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX)、RNase-Free H2O溶解并置于冰上备用。
2. 冰上配制qPCR反应体系：（以20μl反应体系为例）
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX) | 10 μl | 1× |
DNA Template | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
RNase free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
1） 推荐模板加样量为1-2μl / 20μl反应体系，cDNA原液≤总反应体系的10%，基因组DNA的量为10-100 ng。因不同种类的DNA模板中含有的靶基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
2） 通常推荐引物浓度为0.2 μM，就可以得到较好的结果，反应效果不佳时可在0.1 - 1.0 μM范围内进行调整。扩增效率不高的情况下，可提高引物浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
3. qPCR反应程序
注意：
1） 绝大多数情况下使用二步法和三步法均可获得良好效果。建议采用两步法qPCR反应程序。一般来说，二步法扩增特异性高，三步法扩增效率高。如果融链曲线较差，可以尝试两步法扩增或提高退火温度；如果因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试加长延伸时间或者进行三步法PCR扩增。
2） 根据引物的Tm值进行退火&延伸（退火）温度的设定；
3） 延伸（退火&延伸）时间的设置还需要根据您所使用的qPCR仪所需要的最短数据采集时间自行调整。
4） 融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定。
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