III lncRNA cDNA Synthesis Kit反转录
Script III lncRNA cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）采用第三代高效逆转录酶，具有更强的延伸能力和稳定性，并配备了具有DNA分解活性的特殊dsDNase，只需一步操作， 即可同时完成基因组清除与逆转录反应，操作方便快捷。逆转录产物可以用于PCR，克隆基因III lncRNA cDNA Synthesis Kit反转录
Script III lncRNAcDNA Synthesis Kit（With dsDNase）
lncRNAcDNA 第一链合成试剂盒（去基因组）
III lncRNA cDNA Synthesis Kit反转录
目录号:71500
产品内容
Components | 71500-50 25 rxns (20 μl/rxn) | 71500-100 100 rxns (20 μl/rxn) |
5x TRUE Reaction Mix | 100 μl | 400 μl |
dsDNase | 25 μl | 100 μl |
lncRNA-RT primer | 25 μl | 100 μl |
RNase free H2O | 1 ml | 1.5 ml |
保存条件：-20℃保存，有效期 12 个月。
产品简介
Script III lncRNA cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）采用第三代高效逆转录酶，具有更强的延伸能力和稳定性，并配备了具有DNA分解活性的特殊dsDNase，只需一步操作， 即可同时完成基因组清除与逆转录反应，操作方便快捷。逆转录产物可以用于PCR，克隆基因；也可以用于qPCR，兼容染料法和探针法，用来检测高拷贝或低拷贝基因。
lncRNA cDNA 第一链合成试剂盒是专门针对长链非编码RNA（lncRNA）反转录而开发的产品。与 mRNA 相比，lncRNA具有丰度低、GC 含量差异大、二级结构更复杂等特性，传统反转录试剂lncRNA 难以达到理想的效果。本试剂盒含有高效去除基因组 DNA 的 dsDNase，可有效避免残留的基因组DNA 对后续检测结果的干扰。本试剂盒中中使用的反转录酶是通过分子改造后的新型反转录酶，具有更强的 RNA 亲和性和热稳定性，使本试剂盒在通读 GC 含量高，二级结构复杂，低丰度的 RNA 模板和抗逆性等方面表现突出，特别适合表达水平相对较低，二级结构相对复杂的 lncRNA 的反转录反应。
操作步骤：第一连cDNA合成 (以20 μl反应体系为例)
1．反应体系的配制
使用 RNase-Free PCR 管在冰上配制：(使用前，请将各组分轻弹混匀，点甩离心收集至管底，置冰上备用。)
Components | Volume |
Total RNA/mRNA | 50 ng - 5 μg / 5 ng -500 ng |
lncRNA-RT primer | 1 μl |
5x TRUE Reaction Mix | 4 μl |
dsDNase | 1 μl |
RNase free H2O | To 20 μl |
2．轻柔吸打混匀，点甩离心，置 PCR 仪进行逆转录反应。
25℃孵育 10 min 后，产物用于 PCR，42℃孵育 30 min；产物用于 qPCR，42℃孵育 15 min。
注意：如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域，可以先只加 RNA 模板、引物和 RNase free H2O，混匀，65℃变性 5 min，冰上冷却，点甩离心后加入其它成分，将 42℃孵育温度提升至 50°C，有助于提高产量。
3． 85°C加热 5 sec，失活RTase和dsDNase，终止反应。
逆转录产物可立即用于PCR或qPCR反应，或保存于-20°C，并在半年内使用；长期存放建议分装后在-70°C保存，cDNA应避免反复冻融。
PCR（建议取2 - 4 μl的cDNA产物原液作为PCR模板。）
1. 常规扩增： 71800-2x Lightning Taq PCR MasterMix (10sec/kb)
2. 高保真扩增：71814-2×LongHiFi PCR MasterMix (≤10kb，15sec/k)
qPCR（建议取1~2μl cDNA产物原液作为20μl qPCR反应体系的模板。如果基因表达量较高，可以根据实际情况适当稀释cDNA模板后使用。）
III lncRNA cDNA Synthesis Kit反转录
