2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相关
2× LongHiFi PCR Mix为多种采用zui xian进基因工程改造而来的超保真酶添加延伸因子混合而成，极大的提高了扩增长度、扩增速度、保真性和产量。2× LongHiFi PCR Mix是长片段、超保真、快速扩增的shou选产品。2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相关
2× LongHiFi PCR Master Mix (含染料)
2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相关
目录号:71814
产品内容
产品成份 | 71814-05 | 71814-0100 |
2× LongHiFi PCR Master Mix | 5× 1 ml | 100× 1 ml |
保存条件
-20℃保存，有效期 2 年。
经常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 个月。
产品简介
2× LongHiFi PCR Mix为多种采用zui xian进基因工程改造而来的超保真酶添加延伸因子混合而成，极大的提高了扩增长度、扩增速度、保真性和产量。2× LongHiFi PCR Mix是长片段、超保真、快速扩增的shou选产品。
PCR产物为平末端，不需要加A头，可直接用Blunt平末端系列载体克隆。
本产品包含LongHiFi DNA Polymerase、dNTPs和优化的反应缓冲液，浓度为2×。使用时，只需加入模板、引物，并补足水至Mix终浓度为1×即可。
本制品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。
产品特点
1. 高产：一般 PCR 产物量比传统产量高 50%-100%！
2. 高效：延伸速度可以达到 3-4kb/min，是 pfu 的 6-8 倍！
3. 高成功率：对于高 GC 模板和特殊结构的复杂模板有良好效果！
4. 超高保真：保真度是 taq 的 81 倍以上。
5. 扩增长度长：以复杂基因组 DNA 为模板扩增可达 10kb，以简单基因组、质粒和噬菌体 DNA 为模板扩增可达 15kb。
2 × LongHiFi PCR Master Mix 使用说明：
一、配制 PCR 反应体系：(于冰上配制)
Component | 20 μl Reaction | 50 μl Reaction | 终浓度 |
2× LongHiFi PCR Mix | 10 μl | 25 μl | 1 × |
Forward Primer (10 μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Template DNA | as required | as required | |
ddH2O | up to 20 μl | up to 50 μl |
参考模板用量：（以 50 μl 反应体系为例）
质粒：0.1-10 ng；
细菌基因组：10-100 ng；
人类基因组：50-150 ng；
cDNA：1-5 μl from RT。
注意：实际操作中，首先要计算好需要补加 ddH2O 的量以后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分，最后加 LongHiFi PCR Mix，瞬离，上机。
二、设置 PCR 循环条件：（请根据实际情况适当调整）
Step | Temperature | Time | Cycle Number |
Initial denaturation | 94℃ | 3 minutes | |
Denaturation | 94℃ | 10 seconds | 30-35 cycles |
Annealing | 50-60℃ | 10-15 seconds | |
Extension | 72℃ | 15-20 seconds /kb | |
Final Extension | 72℃ | 5 minutes | |
4-8℃ | Hold |
注意：一般情况下，Annealing Temperature = Tm - 5°C
1. 质粒和简单基因组等简单模板，可以采用 10-15 sec/kb；复杂模板 ( 如人类基因组 DNA )，可以采用 20-25 sec/kb。
2. 对于高 GC 含量的模板，预变性和变性温度可以提高到 98℃。
3. 如果电泳发现主带上下拖尾模糊现象，或者泳道出现从上样孔拖下来的涂抹带现象，一般提示延伸时间过长，梯度缩短延伸时间（建议 10-15sec/kb 为梯度减少延伸时间）直到获得满意结果。
三、结果检测：反应结束后取 5 µl 反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。
2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相关
