2× KOD PCR Master Mix(含染料) PCR相关
本产品包含KOD DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。该酶所具有的chao强3’→ 5’外切酶活性使得其保真性比Pfu DNA Polymerase 更高，保真性是Taq DNA Polymerase的80倍，同时具有合成速度快的特点，2× KOD PCR Master Mix(含染料) PCR相关
2× KOD PCR Master Mix (含染料)
2× KOD PCR Master Mix(含染料) PCR相关
目录号:71517
产品内容
产品成份 | 71517-05 | 71517-0100 |
2× KOD PCR Master Mix | 5× 1 ml | 100× 1 ml |
保存条件
-20℃保存，有效期 2 年。经常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 个月。
产品简介
本产品包含KOD DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。该酶所具有的chao强3’→ 5’外切酶活性使得其保真性比Pfu DNA Polymerase 更高，保真性是Taq DNA Polymerase的80倍，同时具有合成速度快的特点，聚合速度约为普通Pfu DNA Polymerase的5倍，Taq DNAPolymerase的2倍，达到100-138bp/秒，可以在短时间内获得高产量的扩增产物，特别适合于高保真地扩增6kb以内的PCR 产物，扩增所得的DNA为平末端，可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。
KOD扩增的PCR产物为平末端（Blunt），可直接用于Blunt载体克隆
本产品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、测序等后续操作。
产品特点
1. 高产：产量是普通 Taq 酶的 2 倍！
2. 高效：延伸速度 100-138bp/sec！
3. 高成功率：对于高 GC 模板和特殊结构的复杂模板有良好效果！
2 × KOD PCR Master Mix 使用说明：
一、配制 PCR 反应体系：(于冰上配制)
Component | 20 μl Reaction | 50 μl Reaction | 终浓度 |
2× KOD PCR Master Mix | 10 μl | 25 μl | 1 × |
Forward Primer(10 μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Reverse Primer(10 μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Template DNA | <0.2 μg | <0.5 μg | as required |
ddH2O | up to 20 μl | up to 50 μl |
参考模板用量：（以 50 μl 反应体系为例）
质粒：0.1-10 ng；
细菌基因组：10-100 ng；
人类基因组：50-150 ng；
cDNA：1-5 μl from RT。
注意：用 ddH2O 补足反应体系（体积）至 50 μl。实际操作中，首先要计算好需要补加 ddH2O 的量以后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分，最后添加 KOD DNA Polymerase。充分混匀后，离心数秒使反应混合物沉到管底，然后将反应管置于 PCR 仪中进行扩增。
二、设置 PCR 循环条件：（请根据实际情况适当调整）
Step | Temperature | Time | Cycle Number |
Initialdenaturation | 94℃ | 3 minutes | |
Denaturation | 94℃ | 20-30 seconds | 30-35 cycles |
Annealing | 50-60℃ | 20-30 seconds | |
Extension | 72℃ | 1-4kb / minute | |
Final Extension | 72℃ | 5 minutes | |
4-8℃ | Hold |
注意：一般情况下，Annealing Temperature = Tm - 5°C
如果扩增片段小于 4 kb，建议 KOD 酶的延伸速度为 1kb / 15 sec；
如果扩增片段大于 4 kb，建议延伸速度为 1kb / 20-30 sec。
三、结果检测：反应结束后取 5 µl 反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。
2× KOD PCR Master Mix(含染料) PCR相关
