2×Pfu PCR Master Mix（含染料） PCR相关
本产品包含Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。 保真度是Taq酶的54倍，用于高保真PCR反应、复杂模板如GC含量高(>60%)， 有二级结构等的扩增和大规模的基因检测。2×Pfu PCR Master Mix（含染料） PCR相关
2× PFU PCR Master Mix(含染料)
2×Pfu PCR Master Mix（含染料） PCR相关
目录号：71111
产品内容
产品成份 | 71111-05 | 71111-0100 |
2× PFU PCR Master Mix | 5x 1ml | 100x 1ml |
保存条件
-20℃保存，有效期 2 年。经常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 个月。
产品简介
本产品包含Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。 保真度是Taq酶的54倍，用于高保真PCR反应、复杂模板如GC含量高(>60%)， 有二级结构等的扩增和大规模的基因检测。
PCR产物为平末端，纯化后可直接用于Blunt载体克隆。
本产品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、测序等后续操作。
适用范围：
高保真DNA扩增:如表达基因的克隆、基因的定点突变、细胞内基因点突变的分析(SNP)和末端补平。
基因检测：适合大规模基因检测，半定量PCR实验和微量DNA的检测。
产品特点
具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度的减少人为误差。
2 × Pfu PCR Master Mix 使用说明：
一、配制 PCR 反应体系：(于冰上配制)
Component | 20 μlReaction | 50 μl Reaction | FinalConcentration |
2× Pfu PCR Mix | 10 μl | 25 μ | 1 × |
Forward Primer (10 μM) | 0.4 μ | 1 μl | 0.2 μM |
Reverse Primer(10 μM) | 0.4 μ | 1 μl | 0.2 μM |
Template DNA | asrequired | as required | |
ddH2O | up to 20 μl | up to 50 μ |
参考模板用量（50 μl 反应体系）：
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
质粒：0.1-10 ng；细菌基因组：10-100 ng；人类基因组：50-150 ng；cDNA：1-5 μl 。
二、建议 PCR 循环条件：
Step | Temperature | Time | Cycle Number |
Initialdenaturation | 94℃ | 3 minutes | |
Denaturation | 94℃ | 10 seconds |
25-35 cycles |
Annealing | 55℃ | 10 seconds | |
Extension | 72℃ | 0.5-1kb / min | |
Final Extension | 72℃ | 5 minutes | |
4-8℃ | Hold |
注意：如果扩增片段≤4 kb，建议延伸速度为 1kb / min；片段＞4 kb，建议 0.5kb / min。
注意事项：
a. Pfu酶具有3′-5′的外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度比Taq酶低，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间，如果扩增片段小于4 kb，建议Pfu酶的延伸速度为1kb/ min；如果扩增片段大于4 kb，建议延伸速度为0.5kb / min。同时Pfu酶的3′-5′的外切酶活性可能降解引物， 所以应先加dNTP后，再加Pfu酶到反应体系中，并立即进行PCR反应。
b. 用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，Tm在55－80℃ 之间，引物浓度在0.1-0.5 μM之间，比Taq酶略高。
c. Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。
三、结果检测：反应结束后取 5 µl 反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。
2×Pfu PCR Master Mix（含染料） PCR相关
