Pfu DNA Polymerase（含超纯dNTP）PCR相关
Pfu DNA Polymerase 是从克隆有DNA Polymerase 基因的大肠杆菌中分离纯化的， Pfu DNA Polymerase具有5′-3′DNA聚合酶活性和3′-5′外切酶活性，能纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配。Pfu酶是目前已发现的所有耐高温DNA Polymerase中出错率zui低的。Pfu DNA Polymerase（含超纯dNTP）PCR相关
Pfu DNA Polymerase (含超纯 dNTP)
Pfu DNA Polymerase（含超纯dNTP）PCR相关
目录号：:71013
产品内容
产品成份 | 71013-0500 | 71013-03000 |
Pfu DNA Polymerase（5U/µl） | 500 U | 3000 U |
10× Pfu Buffer+（with MgSO4） | 1 ml | 6×1ml |
SuperPure dNTP mix（10 mM） | 0.2 ml | 1.2 ml |
保存条件
-20℃保存，有效期 2 年。
经常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 个月。
产品简介
Pfu DNA Polymerase 是从克隆有DNA Polymerase 基因的大肠杆菌中分离纯化的， Pfu DNA Polymerase具有5′-3′DNA聚合酶活性和3′-5′外切酶活性，能纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配。Pfu酶是目前已发现的所有耐高温DNA Polymerase中出错率zui低的。其PCR产物为平端，可直接用平端载体克隆。
活性单位:
1 单位（U）Pfu DNA Polymerase 活性定义为在 74℃、30 分钟内，以活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板引物，将 10 nmol 脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
质量控制:
SDS-PAGE 检测纯度大于 99%，经检测无外源核酸酶活性；PCR 方法 检测无宿主残余 DNA，能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。
酶贮存缓冲液：
50mM Tris-HCl(pH 8.2)，0.1mM EDTA，1mM DTT，Stabilizers，50% glycerol。
10×Pfu Buffer (含Mg2+)：
200 mM Tris-HCl (pH8.8)，100 mM KCl，100 mM(NH4)2 SO4，20 mM MgSO4，其他成分。
适用范围：
用于DNA的高保真扩增，如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变分析（SNP）和平末端补平等。
注意事项：
1. Pfu酶具有3′-5′的外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度比Taq酶低，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间，如果扩增片段小于4 kb，建议Pfu酶的延伸速度为1kb / min；如果扩增片段大于4 kb，建议延伸速度为0.5kb / min。同时Pfu酶的3′-5′的外切酶活性可能降解引物， 所以应先加dNTP后，再加Pfu酶到反应体系中，并立即进行PCR反应。
2. 用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，Tm在55－80℃ 之间，引物浓度在0.1-0.5 μM之间，比Taq酶略高。
3. Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。
4. 高保真PFU对于dNTP纯度要求很高，因此建议用本酶配套的超纯dNTPmix。
Pfu DNA Polymerase的使用说明：
一、 配制 PCR 反应体系：(于冰上配制)
Component | 20μl Reaction | 50μl Reaction | 终浓度 |
Template DNA | as required | as required | 10pg-0.5μg |
Forward Primer (10 μM) | 0.4 μl | 1 μ | 0.2 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.4 μ | 1 μl | 0.2 μM |
10×Buffer（withmgcl2） | 2 μ | 5 μ | |
Pfu DNA polymerase(5U/μl) | 0.2 μl | 0.5μ | |
ddH2O | up to 20 μl | up to 50 μ |
参考模板用量（50 μl 反应体系）：
质粒：0.1-10 ng；细菌基因组：10-100 ng；人类基因组：50-150 ng；cDNA：1-5 μl from RT。
二、 设置 PCR 循环条件：（请根据实际情况适当调整）
Step | Temperature | Time | Cycle Number |
Initial denaturation | 94℃ | 3 minutes | |
Denaturation | 94℃ | 30 seconds |
30-35 cycles |
Annealing | 50-60℃ | 30 seconds | |
Extension | 72℃ | 0.5-1kb / minute | |
Final Extension | 72℃ | 5 minutes | |
4-8℃ | Hold |
三、结果检测：反应结束后取 5 µl 反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。
Pfu DNA Polymerase（含超纯dNTP）PCR相关
