M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒现货
M13和其它的丝状噬菌体载体，在文库构建和为序列测序提供单链DNA和引人突变方面十分有用。将适量M13丝状噬菌体或者相关噬粒（M13来源）感染的液体培养物离心，上清中的单链噬菌体DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒现货
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M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒现货
目录号：40211
目录编号 | 包装单位 |
40211-50 | 50次 |
40211-100 | 100次 |
40211-200 | 200次 |
v 适用范围：
适用于快速提取M13噬粒单链DNA
v 试剂盒组成、储存、稳定性：
试剂盒组成 | 保存 | 50次 | 100次 | 200次 |
结合液MB | 室温 | 25ml | 50ml | 100ml |
漂洗液WB | 室温 | 15ml | 25ml | 2×25 ml |
第一次使用前按说明加指ding量乙醇 | ||||
洗脱缓冲液EB | 室温 | 10ml | 20ml | 40ml |
吸附柱AC | 室温 | 50个 | 100个 | 200个 |
收集管（2ml） | 室温 | 50个 | 100个 | 200个 |
本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:
1. 结合液MB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
v 产品介绍：
M13和其它的丝状噬菌体载体，在文库构建和为序列测序提供单链DNA和引人突变方面十分有用。将适量M13丝状噬菌体或者相关噬粒（M13来源）感染的液体培养物离心，上清中的单链噬菌体DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净噬菌体单链DNA从硅基质膜上洗脱。
v 产品特点：
1. 不需要使用有毒的苯fen等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2. 节省时间，简捷，单个样品操作一般可在10分钟内完成。
3. 产量高，典型的产量800µl M13丝状噬菌体上清可以提取3µg噬菌体单链DNA。
4. 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9。可以直接用来测序，一般典型可辨认读长达650bp。
v 注意事项：
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 开始实验前将需要的水浴先预热到50℃备用。
3. 结合液MB含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
v 操作步骤:（实验前请先阅读注意事项）
以800μl噬菌体感染细菌培养上清提取举例:
提示：第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指ding量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
1. 将M13丝状噬菌体或者相关噬粒（M13来源）感染的液体培养物分装在1.5毫升离心管，12,000rpm离心5分钟沉淀菌体。
2. 小心取800μl上清转入新的1.5ml离心管，加入400μl结合液MB，充分混匀。
如果使用的上清大于或者小于800μl，则结合液MB的用量需要按照比例增加或者减少。
3. 将上述混合物加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液。
吸附柱一次最多只可以容纳大约700μl混合物，因此需要分次把混合物加到吸附柱内，重复步骤3。
4. 加入700μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃废液。
5. 将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
6. 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加60μl洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在 50℃水浴中预热）， 室温放置1分钟，12,000rpm 离心1分钟。如果想得到较多量的DNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，10,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于40μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。
7. DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。
v 附录（M13噬菌体感染细菌培养上清准备过程）:
下面举例说明M13噬菌体感染细菌培养上清准备过程，详细的M13噬菌体（或M13来源噬粒）培养和上清准备过程请参见『分子克隆』第二版。
1. 37℃ 振摇过夜培养合适的噬菌体宿主菌。
2. 使用6％的过夜培养菌接种新鲜的LB培养液，37℃振摇培养一个小时。
3. 根据M13噬菌体的储存液的浓度（滴度）按照0.5-1.5%(V/V)的比例加入噬菌体来感染宿主菌。37℃振摇培养5-6个小时。
4. 将上面M13丝状噬菌体或者相关噬粒（M13来源）感染的液体培养物分装在1.5毫升离心管，12,000rpm离心5分钟沉淀菌体。
5. 可选步骤: 小心取1毫升上清转入新的1.5ml离心管，重复步骤4离心5分钟。
这步有助于去除上清中残留的微量宿主菌RNA或者DNA。
6. 小心取800μl上清转入新的1.5ml离心管。
7. 现在可以按照操作步骤提取噬菌体单链DNA了。
v 问题与解决方法:
问题 | 评论与建议 |
低核酸产量 | *试剂盒储存在非最佳条件-建议：收到试剂盒后总是存放在室温（15℃-20℃） *缓冲液或者试剂暴露于减少它们有效性的条件下-建议：储存在室温（15℃-20℃），每次用完后立刻盖紧盖子，以免溶液蒸发，pH改变和污染。 *漂洗液WB中忘记加无水乙醇-建议：第一次实验时，在漂洗液WB中加入指ding量无水乙醇。 *试剂和样品没有充分混匀-建议：加入每个试剂后都要充分混匀 *噬菌体上清滴度太低-建议：离心取噬菌体感染细菌培养物上清时离心最好不要超过5分钟，转速不要超过12,000rpm，否则噬菌体上清也可能离心下来。重新培养一次噬菌体感染细菌 *洗脱效率不高-建议：确保做了步骤5，否则残留乙醇会影响洗脱 |
DNA下游酶切 | *忘记做步骤5，乙醇抑制了酶切反应-建议：做步骤5，然后空气中晾几分钟，让残留乙醇挥发。 *一些硅基质膜成分一起洗脱下来，抑制了酶切反应-建议：将洗脱的基因组DNA溶液13,000rpm再离心一分钟，小心取上清使用 |
纯化的DNA | *一些硅基质膜成分一起洗脱下来，干扰了分光光度计读数-建议：将洗脱的回收DNA溶液13,000rpm再离心一分钟，小心取上清使用。 |
M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒现货
