小量全血基因组DNA快速提取试剂he
本试剂盒采用du特的裂解液，利用硅胶膜特异吸附DNA，无需酚氯仿等有毒试剂，也无需进行耗时的醇类沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性杂质，得到基因组DNA，无蛋白、核酸酶污染，可直接进行PCR、酶切和杂交等相关分子生物学实验。小量全血基因组DNA快速提取试剂he
FlashPure Blood Genomic DNA Kit
血液基因组 DNA 提取试剂he
（离心柱型）
小量全血基因组DNA快速提取试剂he
目录号:40011
产品内容：
产品成分 | 40011-50（50 次） | 40011-100（100 次） |
平衡液 | 5ml | 10ml |
缓冲液 BB | 10ml | 20ml |
结合液 CB | 11ml | 20ml |
抑制物去除液IR | 25ml | 50ml |
漂洗液WB | 13ml | 25ml |
洗脱缓冲液 EB | 10ml | 15ml |
蛋白酶 K 溶液 | 1ml | 2x 1 ml |
DNA 吸附柱和收集管 | 50套 | 100套 |
10x 红细胞裂解液（赠送） | 10ml | 20ml |
自备试剂：
无水乙醇，RNase A（可选）
保存条件：
室温（15~25℃）
蛋白酶K，室温可保存6个月，4℃保存 12个月，~20℃保存 2 年。
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
产品简介：
适用于从新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液样本中快速提取高质量的基因组DNA，也可以提取白膜层和血凝块。
本试剂盒采用du特的裂解液，利用硅胶膜特异吸附DNA，无需酚氯仿等有毒试剂，也无需进行耗时的醇类沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性杂质，得到基因组DNA，无蛋白、核酸酶污染，可直接进行PCR、酶切和杂交等相关分子生物学实验。
产品特点：
1. 简便快速：30min内可获得高纯度的基因组 DNA。
2. 安全无毒：无需苯fen/氯仿抽提。
3. 高产：典型的产量 200µl全血可提取出 3～6µg 基因组 DNA，
4. 高纯：OD260/280=1.7～1.9，长度可达 30～50 kb，可直接进行 PCR、酶切和杂交等分子生物学实验。
注意事项：
1. 如果结合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，摇匀后使用。
2. 开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。
3. 为了zui jia效果，zui hao使用新鲜血液标本或者4℃存放少于3天的标本，不要使用反复冻融超过3次的标本，否则会严重降低产量。
4. 不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大。
5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH8.0），但是EDTA可能下游酶切反应，使用时可以适当稀释
操作步骤：
第一次使用前，请先在漂洗液WB中加入指ding量无水乙醇，详见瓶身的标签。提示：所有离心步骤必须在室温（15~25℃）下进行。
1. 柱平衡：向吸附柱的膜中央（吸附柱放入收集管中）加入100μl平衡液，12,000rpm离心1min，弃滤液，将吸附柱重新放回收集管中。
（请使用当天处理过的柱子）
2. 取 200μl新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，放入1.5ml离心管。
▲如果血液起始量小于200μl，则用1×PBS补足到200μl。
如果起始量介于200μl-300μl之间，则需要按照比例增加试剂用量。
如果起始量介于300μl~1 ml之间，则需要先进行红细胞裂解操作: 将10x红细胞裂解液用灭菌水稀释到1x，然后在样品中加入3倍体积的1x红细胞裂解液，颠倒混匀，室温放置10 min，期间再颠倒混匀几次。 13,000rpm离心20 sec(对于1.5 ml离心管)或2,000~3,000rpm离心5 min(对于15ml离心管)，吸去上清，留下白细胞沉淀（如果看到的是大部分的红色细胞团，则再次加入3倍1x红细胞裂解液，重复裂解一次），加入200 μl 1× PBS，振荡至che底悬浮。
▲提取凝固血时需要在操作前用枪头捣碎血凝块后按照正常步骤进行。
▲如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量仅用5~20μl，可加1×PBS补足到200μl后，进行下面的裂解步骤。
3. （可选，一般不需要）如果需要去除 RNA，可向200μl的血液样品中加入5μl RNase A(100mg/ml) 溶液，振荡混匀，室温放置5~10min。
4. 加入20μl蛋白酶K溶液，充分振荡混匀。
5. 加入200μl结合液CB，充分振荡混匀，70℃放置10min，期间颠倒混匀几次，溶液应该变清亮，但颜色偏黑。（如果未变清亮，请延长时间）
6. 冷却后加100μl无水乙醇 (或异丙醇)，充分振荡混匀，此时可能会出现絮状沉淀，短暂离心以去除管盖内壁水珠。
7. 将所得溶液和絮状沉淀加入一个DNA 吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心1min，DNA被吸附在膜上，倒弃滤液。
8. 加入500μl抑制物去除液 IR，13,000rpm离心30sec，倒弃滤液。
9. 加入600μl漂洗液 WB（请检查是否已加入无水乙醇），13,000rpm离心30sec，倒弃滤液。
10. 重复步骤9一遍。
11. 将DNA吸附柱放回空收集管中，13,000rpm离心2min，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
12. 取出DNA吸附柱，放入一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中央加入100μl洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在80~100℃水浴中预热可以提高产量）， 室温放置3~5min，13,000rpm离心1min。
▲可将第一次洗脱所得的DNA溶液重新加入离心柱中，室温放置 2min，13,000rpm离心1min。可以提高浓度10%左右。
13. DNA可以存放在 2~8℃，如果要长时间存放，可以放置在-20℃。
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