组织/细胞基因组DNA快速提取试剂he
适用于从动物组织、培养细胞中快速提取高质量的基因组DNA。 本试剂盒采用du特的裂解液，利用硅胶膜特异吸附DNA，无需酚氯仿等 有毒试剂，也无需进行耗时的醇类沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性杂质，得到基因组DNA，无蛋白、核酸酶污染，可直接进行PCR、酶切和杂交等相关分子生物学实验。组织/细胞基因组DNA快速提取试剂he
FlashPure Tissue/Cell Genomic DNA Kit
动物组织/细胞基因组 DNA 提取试剂he
（离心柱型）
组织/细胞基因组DNA快速提取试剂he
目录号:40017
产品内容：
产品成份 | 40017－50（50次） | 40017－100（100次） |
平衡液 | 5ml | 10ml |
裂解液TL | 11ml | 20ml |
结合液CB | 11ml | 20ml |
抑制物去除液IR | 25ml | 50ml |
漂洗液WB | 13ml | 25ml |
洗脱缓冲液EB | 10ml | 15ml |
蛋白酶K溶液 | 1ml | 2x1ml |
DNA吸附柱和收集管 | 50套 | 100套 |
自备试剂:
无水乙醇，RNase A（可选）
保存条件:
室温（15~25℃）
蛋白酶K，室温可保存 6 个月，4℃保存 12 个月，- 20℃保存 2 年。
产品简介:
适用于从动物组织、培养细胞中快速提取高质量的基因组DNA。
本试剂盒采用du特的裂解液，利用硅胶膜特异吸附DNA，无需酚氯仿等有毒试剂，也无需进行耗时的醇类沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性杂质，得到基因组DNA，无蛋白、核酸酶污染，可直接进行PCR、酶切和杂交等相关分子生物学实验。
产品特点:
1. 简便快速：30 min内可获得高纯度的基因组DNA。
2. 安全无毒：无需苯fen/氯仿抽提。
3. 高纯：OD260/280=1.7～1.9，长度可达30～50kb，可直接进行 PCR、酶切和杂交等分子生物学实验。
注意事项:
1. 如果裂解液TL、结合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴 溶解，摇匀后使用。
2. 开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。
3. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游 酶切反应，使用时可以适当稀释。
操作步骤:
第一次使用前，请先在漂洗液 WB 中加入指ding量无水乙醇，详见瓶身的标签。
提示：所有离心步骤必须在室温（15~25℃）下进行。
1. 柱平衡：向吸附柱的膜中央（吸附柱放入收集管中）加入 100μl平衡液，12,000rpm离心1min，弃滤液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
2. 材料处理：
a. 动物组织
将动物组织在液氮中研磨成细粉（或者用解剖dao切成小碎块），取约 25mg转入1.5ml离心管中，加入180μl裂解液TL，再加入20μl蛋白酶K溶液，振荡至che底悬浮，56℃水浴1~3小时，直至组织wan全消化溶解。
推荐样本投入量：动物组织≤25 mg，动物脾脏≤10 mg。
鼠尾样本投入量：大鼠尾巴最大用量为0.6 cm长片段，小鼠鼠尾巴最大用量为1.2cm长片段，并将裂解时间延长至6-8小时。
注意：水浴过程中，每10分钟颠倒混匀一次，可促进细胞裂解。
b. 培养细胞
① 105~ 106悬浮细胞到一个 1.5 ml 离心管；对于贴壁细胞，应该先 用胰蛋白mei消化后吹打下来收集。
② 13,000rpm离心10sec，吸弃上清，留下细胞团和大约 10~20μl 残留的液体。
③ 加入200μl 1× PBS，振荡至细胞充分悬浮，洗涤细胞去除杂质，13,000rpm离心10sec，wan全吸弃上清。
④ 再次加入 180 μl 1× PBS，振荡混匀，使细胞che底悬浮。
⑤ 加入20μl蛋白酶K溶液，充分混匀。
3. （可选步骤）加入 5 μl RNase A (100mg/ml) 溶液，振荡混匀，室温 放置5~10min。
4. 加入200 μl结合液 CB，充分振荡混匀，70℃水浴或金属浴处理10 min。
5. 冷却后加100μl无水乙醇 (或异丙醇)，充分振荡混匀，此时可能会出现絮状沉淀，短暂离心以去除管盖内壁水珠。
6. 将所得溶液和絮状沉淀加入一个 DNA 吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm离心1min，DNA 被吸附在膜上，倒弃滤液。
7. 加入500μl抑制物去除液 IR，13, 000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。
8. 加入600μl漂洗液WB（请检查是否已加入无水乙醇），13, 000rpm离心30sec，倒弃滤液。
9. 重复步骤 9 一遍。
10. 将DNA吸附柱放回空收集管中，13, 000 rpm 离心 2 min，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
11. 取出DNA吸附柱，放入一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中央加入100μl洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在80 ~ 100℃水浴中预热可以提高产量），室温放置3~5min，13,000rpm离心1min。
12. DNA可以存放在2~ 8℃，如果要长时间存放，可以放置在-20℃。
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