NobleRyder 蛋白银染试剂盒
NobleRyder 蛋白银染试剂盒 NobleRyder 即用型液体试剂 P2825-20T
蛋白银染试剂盒
产品简介:
蛋白银染试剂盒(Protein Silver Stain Kit)是一种比较快速的可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白银染染色的试剂盒,该试剂盒含有增敏步骤,可明显降低背景。其优点还在于:1、操作简单、快速;2、可用于2D凝胶的银染,并可进行后续的质朴检测;3、目的条带清晰;4、不含甲醇。Protein Silver Stain Kit与Protein Fast Silver Stain Kit相比,前者检测灵敏度更高,尤其是在检测小分子量蛋白质的时候,但后者操作速度更快。本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
NobleRyder 蛋白银染试剂盒
产品组成:
编号 名称 | P2825 20T | Storage |
试剂(A): Silver Fixaton buffer(5×) | 100ml | RT 避光 |
试剂(B): Sil ilver Stain Sensitizer(5×) | 100ml | RT 避光 |
试剂(C): Silver Stain | 2×250ml | RT 避光 |
试剂(D): Silver Stain Enhancer(25×) | 2×10ml | RT 避光 |
试剂(E): Silver Stain Developer(5×) | 100ml | RT 避光 |
试剂(F): Silver Stain Stop Buffer(10×) | 100ml | RT |
使用说明书 | 1份 |
自备材料:
1.水平摇床或侧摆摇床
2.去离子水(超纯)、乙醇、冰乙酸
操作步骤(仅供参考):
1.准备工作:以下操作以8.5×5.5cm、厚度为1.0mm的凝胶为例,以凝胶全部浸没到溶液为准,一般用量是25~50ml,对于凝胶体积较大的,各溶液的使用量需按凝胶体积比例放大。整个银染过程均应在摇床上持续摇动进行,摇床转速控制在60~70rpm。提前配制固定液,固定液A按无水乙醇:冰乙酸:去离子水=5:1:4的比例配制,固定液B按无水乙醇:冰乙酸:去离子水=1:1:18的比例配制。
2.水洗:电泳结束后,取凝胶放入去离子水中,摇床上清洗2次,每次5min。
3、固定:弃液,取凝胶放入50~100ml固定液A中,在摇床上室温摇动1h;取凝胶放入50~100ml固定液B中,在摇床上室温摇动2h至过夜;取凝胶放入50~100ml去离子水中,在摇床上室温摇动5min;取凝胶放入25ml1×Silver Fixaton buffer中,在摇床上室温摇动30min。(1×Silver Fixaton buffer,即取Silver Fixaton buffer (5×)5ml加入到20ml去离子水中,混匀,即1×Silver Fixaton buffer,一般应24h内用完。)
4、水洗:弃固定液,取凝胶放入50~100ml去离子水中清洗32次,每次10min。
6、增敏:弃液。配制银染增敏工作液,即取Silver Stain Sensitizer 5×)5ml加入到20ml去离子水中,混匀,即1×Silver Stain Sensitizer,一般应2h内用完。室温下用1×Silver Stain Sensitizer孵育凝胶2次,每次30min。立即用去离子水清洗凝胶4次,每次15min。
7、银染:配制银染工作液,即取1ml Silver Stain Enhancerl加入到24m Silver Stain中,混匀,即得银染工作液,一般应2h内用完。取凝胶入银染工作液,在摇床上室温摇动30min。
8、水洗:弃液,在摇床上用去离子水清洗凝胶4次,每次4min。
9、显影:配制银染显影工作液,即取Silver Stain Developer(5×)5ml加入到20ml去离子水中,混匀,即1×Silver Stain Developer,一般应30min内用完。清洗凝胶后,立即置于1×Silver Stain Developer中,室温孵育5~10min,直至蛋白条带清晰可见。一般显色30s后就会出现棕色沉淀,继续显影2~3min,亦可延长至5min以上,如果显影效果不佳,可重新更换1×Silver Stain Developer继续显影。
注意事项:
1、背景过深:①显色时间过长;②洗涤不充分;③凝胶中残留物质未去除干净;④去离子水的纯度过低。
2、蛋白条带较浅:①蛋白的半guang氨酸含量过低;②银染后水洗时间过长;③蛋白量较低;④固定后的洗涤时间不够,导致乙酸残留。
3、凝胶上出现杂质或非蛋白的印迹:①凝胶没有被充分浸没,应加入足量溶液;②容器没有清洗干净;③凝胶接触金属物质;④指纹或其他压迹。
4、本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。
有效期: 3个月有效。
NobleRyder 蛋白银染试剂盒