NobleRyder还原型抗坏血酸维生素C含量
NobleRyder还原型抗坏血酸维生素C含量测试盒NobleRyder 还原型抗坏血酸(AsA)/维生素C含量测试盒(紫外分光光度法) 50管/48样 AM0002
NobleRyder还原型抗坏血酸维生素C含量测试盒
测定意义:AsA又称维生素C。AsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂,AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用,也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。
测定原理:抗坏血酸氧化酶(AAO)催化AsA氧化生成DHA,通过测定AsA的氧化速率,即可计算出AsA含量。
自备仪器和用品:研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、1 mL石英比色皿、可调式移液器和蒸馏水。
操作步骤:
一、样品中AsA提取:
按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂
一)进行冰浴匀浆,10000rpm 4℃离心20min,取上清液待测。
二、AsA测定操作:
1.分光光度计预热30 min,调节波长到265 nm,蒸馏水调零。
2.试剂二在25℃水浴锅中预热30 min以上。
3.标准管:依次在比色皿中加入100μL标准液、800μL试剂二和100μL试剂三,迅速混匀,在265nm测定,记录30s和150s的吸光值A1和A2,△A标准管= A1-A2。
4.测定管:依次在比色皿中加入100μL上清液、800μL试剂二和100μL试剂三,迅速混匀,在265nm测定,记录30s和150s的吸光值A3和A4,△A测定管= A3-A4。
三、AsA含量计算:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按蛋白浓度计算
AsA (μmol/mg prot) =[C标准液×(△A测定管÷△A标准管×V标准)÷(Cpr ×V样)
=0.1 ×△A测定管÷△A标准管÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
AsA (μmol/g ) =[C标准液×(△A测定管÷△A标准管×V标准)÷(W ×V样÷V样总)
=0.1 ×△A测定管÷△A标准管÷W
C标准液:100μmol/L;V 标准:标准液体,0.1mL;V样总:上清液总体积,1.0 mL=1 ×10-3 L;
V 样:加入反应体系中上清液体积,0.1mL ;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量(g)。
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