产品展示
当前位置:首页 > 全部产品 > FUJIFILM Wako富士和光 > > 192-17401FUJIFILM Wako蛋白磷酸化研究的预制胶

FUJIFILM Wako蛋白磷酸化研究的预制胶

  • 型   号:192-17401
  • 价   格:
  • 更新时间:2023-05-03
  • 厂家性质:经销商

蛋白磷酸化研究的预制胶SuperSep Phos-tag™,145-08221产品简介:
产品品牌:FUJIFILM Wako
产品名称:蛋白磷酸化研究的预制胶SuperSep Phos-tag™
产品货号:192-17401
产品规格:5块
FUJIFILM Wako蛋白磷酸化研究的预制胶

蛋白磷酸化研究的预制胶SuperSep Phos-tag™192-17401

蛋白磷酸化研究的预制胶SuperSep Phos-tag™,145-08221产品简介:

产品品牌:FUJIFILM Wako

产品名称:蛋白磷酸化研究的预制胶SuperSep Phos-tag™

产品货号:192-17401

产品规格:5块

FUJIFILM Wako蛋白磷酸化研究的预制胶


本产品详情页介绍里面出现*或X代表有网络不能使用的词汇,如需详细的说明请联系本店客服。


SuperSep Phos-tag™ 是研究蛋白磷酸化的方法,无需特异性磷酸化抗体或者同位素标记。


192-17401.jpg

◆SuperSep Phos-tag™

  Phos-tag™ 是一种预制胶,预先加入了 50 μmol/L 的 Phostag™ Acrylamide,打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子,在中心凝胶缓冲液中保存稳定性很好,得到的带条结果也很整齐。

  磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白作为不同条带分离。

  分离后,胶可用于考马斯亮蓝染色,免疫印迹和质谱实验。

◆Phos-tag™ SDS-PAGE 的原理

192-17401+1.jpg

◆在 HighWire Search 上搜索到的论文数

192-17401+2.jpg

◆运用

利用 p35 的丙*酸突变体确定 Cdk5 激活 p35 的磷酸化位点

  p35 常见的磷酸化位点是 Ser8 和 Thr138。但是 Ser8 和 Thr138 位点往往会发生丙*酸突变,产生3种突变体(Ser8 突变体:S8A,Thr138 突变体:T138A,Ser8 和 Thr138 双突变体:2A)。这3种突变体、野生型 p35、Cdk5 和没有激酶活性的 Cdk5 都来源于 COS-7 细胞。这些细胞裂解液用Phos-tag™ SDS-PAGE 和 Western blotting 进行检测(检测抗体:p35 抗体)。

192-17401+3.jpg

100 μM Phos-tag ™ 丙**胺, 7.5% 聚丙**胺凝胶

可明确磷酸化位点和条带迁移率的关系!

- 泳道1(条带 L2 和 L4)和泳道5(条带 M1):p35 在 Cdk5 的作用下发生了磷酸化;

- 泳道1(条带 L2 和 L4)和泳道3(条带 L2 和 L4):在无激酶活性 Cdk5 的作用下,大约有一半 p35 蛋白在 Thr138 位点发生磷酸化,同样在 138 位发生突变的 p35 蛋白亦是如此。

- 泳道5 (条带 M1)和泳道6(条带 L3 和 L4):Ser8 和 Thr138 是主要的磷酸化位点;

- 泳道5(条带 M1)、泳道7(条带L1和L2)和泳道8(条带M2):条带 M1 是 Ser8 和T hr138 都发生磷酸化的条带;

条带 M2 是只有 Ser8 磷酸化的条带;条带 L1 和 L2 是只有 Thr138 磷酸化的条带。

※ 条带 L1 和 L3 中的X是不确定哪个位点发生磷酸化的条带;

※ 条带L4是非磷酸化的 p35 。

【参考文献】

▪ Quantitative Measurement of in Vivo Phosphorylation States of Cdk5 Activator p35 by Phos-tag ™ SDS-PAGE. T. Hosokawa, T. Saito, A. Asada, K. Fukunaga, and S. Hisanaga,Mol. Cell. Proteomics, Jun 2010;9: 1133 - 1143.

【结果提供】

理化学研究所 脑科学综合研究中心 回路功能研究核心 记忆功能研究团队 细川智永(Dr. T. Hosokawa)

首都大学东京 理工学研究科 生命科学专业 神经分子功能研究室 久永真市(Dr. S. Hisanaga)

检测含有 Dnmt1 磷酸化激酶的片段

192-17401+4.jpg

我们可以确定在片段中含有目的激酶!

① 采用亲和色谱法从鼠脑提取液中纯化 GST-Dnmt1(1-290)结合蛋白

② 使用 0.3 M 和 1 M NaCl 的 DNA 纤维素柱洗脱得到目的蛋白

③ GST-Dnmt1(1-290)作为体外激酶实验的反应底物

④ Phos-tag ™ SDS-PAGE 用于Western blotting,确定迁移条带中每个片段的激酶活性

【参考文献】

The DNA-binding activity of mouse DNA methyltransferase 1 is regulated by phosphorylation with casein kinase 1delta/epsilon. Y. Sugiyama, N. Hatano, N. Sueyoshi, I. Suetake, S. Tajima, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and I. Kameshita, Biochem. J., May 2010; 427(3): 489-97.

【结果提供】

高知大学 综合研究中心 生命、功能物质部门 实验实习机器设施 杉山康宪(Dr. Y. Sugiyama)

香川大学 农学部 应用生物科学科 动物功能生化学研究室 龟下勇(Dr. I. Kameshita)

二维电泳中的应用:分析 hnRNP K 磷酸化异构体

  小鼠巨噬细胞 J774.1 经 LPS 刺激后,裂解细胞,经过免疫沉淀法分离得到 hnRNP K。在二维电泳中,一维是 IPG 胶,二维是 Phos-tag ™ SDS-PAGE,可分离 hnRNP K 的异构体。利用质谱仪,可以确认不同的点代表不同的亚型或修饰蛋白。

192-17401+5.jpg

同一个等电点的位置上,不同位点发生磷酸化都可以被区分开来

(例: spots 6 vs. 8 and spots 4 vs. 7)

【参考文献】

▪ Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. Y. Kimura, K. Nagata, N Suzuki, R. Yokoyama, Y. Yamanaka, H. Kitamura, H. Hirano, and O. Ohara, Proteomics, Nov 2010; 10(21): 3884-95.

【结果提供】

横滨市立大学 生命纳米系统科学研究科 生物体超分子系统科学专业 木村弥生(Dr. Y. Kimura)、平野久(Dr. H. Hirano)

理化学研究所 RCAI 小原收

◆备注

样品制备:

Phos-tag SDS-PAGE 对于蛋白样品中的杂质非常敏感,尤其是螯合剂,钒酸,无机盐,表面活性剂这类物质。

强烈建议在 Phos-tag SDS-PAGE 之前通过 TCA 沉淀或渗析法降低杂质含量。

转膜前处理:

另一个必须的步骤是在转膜前,用 EDTA 去除凝胶中的金属离子(Mn2+ 或者Zn2+);该步骤可提高蛋白的转膜效率。

● 分别准备 10 mmol/L 含 EDTA 和不含 EDTA 两种 1x transfer buffer。

● 将凝胶浸泡在含 10 mmol/L EDTA 的 1x transfer buffer,至少 20 分钟,温和摇晃。更换新缓冲液,重复3次。

● 将凝胶浸泡在不含 10 mmol/L EDTA 的 1x transfer buffer,10 分钟,温和摇晃。

● 转膜操作*。

* 建议用湿法转膜,以提高转膜效率。

192-17401+6.jpg

◆质量控制

  每一批 SuperSep Phos-tag™,出厂前均根据其产品规格进行测试,以保证可分离磷酸化和非磷酸化蛋白,以及他们的分离成都在正常参数内。

保存温度

2-10℃

◆产品信息

用于 Bio-Rad 伯乐电泳仪

货号

品名

电泳仪

规格

198-17981

SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/L), 7.5%, 17well,

83×100×3.9mm

Mini-PROTEAN®

Tetra Cell

(Bio-Rad Laboratories, Inc.)

5 块

195-17991

SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/L), 12.5%, 17well,

83×100×3.9mm

5 块

用于 Life Technologies 电泳仪

货号

品名

电泳仪

规格

192-18001

SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/L), 7.5%, 17well,

100×100×6.6mm

XCell SureLock®

Mini-Cell

(Life Technologies, Inc.)

5 块

199-18011

SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/L), 12.5%, 17well,

100×100×6.6mm

5 块

用于 Wako EasySeperator 电泳仪

产品编号

产品

凝胶浓度

孔数

包装

192-17401

SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L)
Phos-tag™ 预制胶50 μmol/L

6.0%

13孔

5块

199-17391

6.0%

17孔

5块

195-17371

7.5%

13孔

5块

192-17381

7.5%

17孔

5块

193-16711

10.0%

13孔

5块

190-16721

10.0%

17孔

5块

195-16391

12.5%

13孔

5块

193-16571

12.5%

17孔

5块

193-16691

15.0%

13孔

5块

196-16701

15.0%

17孔

5块

197-16851

17.5%

13孔

5块

194-16861

17.5%

17孔

5块

相关产品

产品编号

产品名称

规格

058-07681

EasySeparator
Phos-tag预制凝胶的配套电泳槽

1 set

产品编号

产品名称

产品规格

Wako,193-16711

SuperSep Phos-tag™  (50 μmol/L), 10%, 13 well

Phos-tag 13

10%预制胶


5

Wako,190-16721

SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 17 well

Phos-tag 17

10%预制胶


5

Wako,195-16391

SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 13 well

Phos-tag 13

12.5%预制胶


5

Wako,193-16571

SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 well

Phos-tag 17

12.5%预制胶


5

Wako,193-16691

SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13 well

Phos-tag 13

15%预制胶


5

Wako,196-16701

SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 17 well

Phos-tag 17

15%预制胶


5

Wako,197-16851

SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 13 well

Phos-tag 13

17.5%预制胶


5

Wako,194-16861

SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 17 well

Phos-tag 17

17.5%预制胶


5

FUJIFILM Wako蛋白磷酸化研究的预制胶



留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7

北京诺博莱德科技有限公司 版权所有
京ICP备12025092号-2   sitemap.xml
电话:
010-62817090
  • 点击这里给我发消息
  • 点击这里给我发消息
  • 点击这里给我发消息