概述

糖苷内切酶 H 是一种重组糖苷酶，能够对 N- 糖蛋白中的高甘露糖型和某些杂合型寡聚糖的壳二糖核心结构进行切割（ 1 ）。

反应条件

在糖蛋白变性缓冲液（含 5% SDS ， 40 mM DTT ）中 100 ℃ 煮沸 10 分钟使糖蛋白变性。在 1X G5 反应缓冲液 [50 mM 柠檬酸钠（pH 5.5 @ 25 ℃ ） ] 中于 37 ℃ 温育，以进行酶解反应。

随酶提供的试剂

10X 糖蛋白变性缓冲液 
10X G5 缓冲液

分子量

Endo H ： 29 kDa

*

无外切糖苷酶污染，无蛋白水解活性。

单位定义

1 单位指在 10 μl 的反应体系中， 37 ℃ 条件下 1 小时从 10 μg 变性 RNase B 中除去超过 95% 的碳水化合物所需要的酶量（ 10 NEB units = 1 IUB milliunit ）。

浓度

Endo H ： 500,000 units/ml

贮存条件

20 mM Tris-HCl （ pH 7.5 @ 25 ℃ ）， 50 mMNaCl 和 5 mM Na₂EDTA ，贮存于 -20 ℃ 。

使用注意

酶的活性不受 SDS 抑制。

要使天然糖蛋白去糖基化，或许需要增加酶量和延长温育时间。

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