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细胞转入细胞无血清培养基养要有一个适应过程
发布时间:2022-12-14   点击次数:131次
  血清仍是动物细胞培养中最基本的的添加物,尤其是在原代培养或者细胞生长状况不良时,常常会先使用有血清的培养液进行培养,待细胞生长旺盛以后,再换成无血清培养液。
 
  细胞转入细胞无血清培养基养要有一个适应过程,一般要逐步降低血清浓度,从10%减少到5%,3%,1%,直至无血清培养。
 
  在降低过程中要注意观察细胞形态是否发生变化,是否有部分细胞死亡,存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。
 
  在实验后这些细胞一般不再继续保留,很少有细胞能够长期培养于无血清培养基而不发生改变的。细胞转入无血清培养之前,要留有种子细胞,种子细胞按常规培养于含血清的培养基中,以保证细胞的特性不发生变化。
 
  为了使细胞适应无血清培养,关键的是使所培养细胞:
 
  1.处于对数生长中期
 
  2.>90% 活细胞率
 
  3.适应时以较高的起始细胞接种
 
  细胞适应无血清培养基的方法
 
  1.直接适应——细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基(SFM)中。
 
  一些类型细胞可直接从包含血清的培养基适应无血清培养基。对于直接适应,接种细胞密度应该:2.5×10~3.5×10细胞/ml。当细胞密度达到1×10~3×10细胞/ml时,传代培养细胞。当细胞密度在培养4到7天后达到2×10~4×10细胞/ml时,细胞适应了无血清培养基。每隔3~5天,当细胞密度达到1×10~3×10细胞/ml,细胞活率在90%时,贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。
 
  2.连续适应——分好几步把细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基(SFM)中,与直接适应相比较,连续适应趋向对于细胞更加温和一些。
 
  (1)以2倍正常接种密度接种生长活跃的细胞培养物到75%有血清培养基:25%SFM 混合培养基中,传代培养。
 
  (2)当细胞密度>5×10细胞/ml时,以2×10到3×10细胞/ml细胞密度,在有血清培养基:SFM为50∶50的混合培养基中传代培养。
 
  (3)以2×10到3×10细胞/ml细胞密度,25%有血清培养基和75% SFM中传代培养。
 
  (4)当细胞密度达到1×10到3×10细胞/ml(接种后4到6天),在100%SFM培养基中传代培养。
 
  (5)每隔3到5天,当细胞密度达到1×10到3×10细胞/ml,细胞活率在90%时,贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。

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