看完本篇你就知道该如何使用MPbio土壤提取试剂了
更新时间：2021-10-13 点击次数：1134次
MPbio土壤提取试剂可在30分钟之内，快速、有效地从土壤以及其他环境样品中提取基因组DNA。适用于从土壤中的所有生物包括G+细菌、酵母菌、真菌、藻类、线虫类甚至真细菌的孢子、芽孢中提取基因组DNA。
而且它还可以提取其他环境样品的DNA，如沉积物、排泄物、废水、雪水等。只需500mg的样品即可得到足够的DNA。
实验原理为用特殊的裂解介质E处理样品，之后使用自旋过滤器基于硅吸附DNA原理的GENECLEAN?步骤进行纯化，得到的DNA可用于PCR、限制性酶切、电泳及其他下游实验。
很多用户对于MPbio土壤提取试剂的提取方法不是很清楚，特别是对于没有仪器的情况下，更是感到无从下手。
为了解决用户的烦恼，特整理了MPbio土壤提取试剂的提取方法，分享给大家，只需按照步骤操作，即使没有仪器的情况下，也可以快速提取土壤DNA!
1、称取0.3g~0.4g样品加入LysingMatrixETube中。(注意：需保证加完样品及所需溶液后，管中应留出不少于200μL空间)
2、加入978μLSPB，加入122μLMTBuffer。
3、盖紧LysingMatrixETube的盖子，将离心管置于涡旋混合仪上，对管内物质进行震荡破碎均质化，时间设定为40s~50s。(注意：时间不可过长，有可能打断基因组DNA片段降低提取质量)从各个角度都可以震荡一下，不要光是底部。
4、在8000r/min转速下离心15min，有利于去除体积较大或具有复杂细胞壁结构的样品碎屑。
5、将上清液用大口枪头吸出转入1.5mL的微离心管中，加入250μLPPS，手持离心管晃动10次以混匀。
6、在8000r/min下离心5min，用大口枪头将上清液转移至5mL离心管中。
7、摇匀BindingMatrix后，吸取1.0mL加入上一步离心管中。
8、将离心管上下颠倒2min后，静置3min，使DNA附着于BingdingMatrix上，并等待二氧化硅基质沉淀。(这一步根据沉淀情况时间可以适当延长)
10、将剩余的上清液与沉淀物重新混匀，吸取约600μL混合液移入SPINFilter中，8000r/min下离心1min。
11、倒掉收集管中的液体，重复上一步操作直至5mL离心管中的液体吸尽。
12、加入已制备好的SEWS-M溶液500μL，用小枪头小心混匀后，8000r/min下离心1min后，弃去收集管中的液体。
13、为更好的去除杂离子，重复第12步，更换为1.5mL离心管。
14、在8000r/min下离心2min，去除残留的SEWS-M溶液，然后更换为干净的1.5mL离心管。(若发现残余溶液较多，可重复此步骤)
15、在室温下，将SPINFilter风干5min。(时间可以更久一些)
16、往SPINFilter加入80μLDES溶液，用小枪头小心使之与BindingMatrix混匀，65℃水浴15min(有利于DNA的溶出)。8000r/min下离心2min，可得到约50μL的DNA溶液。再加入80μLDES溶液重复第16步操作，一共可得到约100μL的DNA溶液。
17、弃去SPINFilter，将提取好的DNA存于-20℃冰箱保存。
