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看完本篇你就知道该如何使用MPbio土壤提取试剂了
发布时间:2021-10-05   点击次数:625次
  MPbio土壤提取试剂可在30分钟之内,快速、有效地从土壤以及其他环境样品中提取基因组DNA。适用于从土壤中的所有生物包括G+细菌、酵母菌、真菌、藻类、线虫类甚至真细菌的孢子、芽孢中提取基因组DNA。
 
  而且它还可以提取其他环境样品的DNA,如沉积物、排泄物、废水、雪水等。只需500mg的样品即可得到足够的DNA。
 
  实验原理为用特殊的裂解介质E处理样品,之后使用自旋过滤器基于硅吸附DNA原理的GENECLEAN?步骤进行纯化,得到的DNA可用于PCR、限制性酶切、电泳及其他下游实验。
 
  很多用户对于MPbio土壤提取试剂的提取方法不是很清楚,特别是对于没有仪器的情况下,更是感到无从下手。
 
  为了解决用户的烦恼,特整理了MPbio土壤提取试剂的提取方法,分享给大家,只需按照步骤操作,即使没有仪器的情况下,也可以快速提取土壤DNA!
 
  1、称取0.3g~0.4g样品加入LysingMatrixETube中。(注意:需保证加完样品及所需溶液后,管中应留出不少于200μL空间)
 
  2、加入978μLSPB,加入122μLMTBuffer。
 
  3、盖紧LysingMatrixETube的盖子,将离心管置于涡旋混合仪上,对管内物质进行震荡破碎均质化,时间设定为40s~50s。(注意:时间不可过长,有可能打断基因组DNA片段降低提取质量)从各个角度都可以震荡一下,不要光是底部。
 
  4、在8000r/min转速下离心15min,有利于去除体积较大或具有复杂细胞壁结构的样品碎屑。
 
  5、将上清液用大口枪头吸出转入1.5mL的微离心管中,加入250μLPPS,手持离心管晃动10次以混匀。
 
  6、在8000r/min下离心5min,用大口枪头将上清液转移至5mL离心管中。
 
  7、摇匀BindingMatrix后,吸取1.0mL加入上一步离心管中。
 
  8、将离心管上下颠倒2min后,静置3min,使DNA附着于BingdingMatrix上,并等待二氧化硅基质沉淀。(这一步根据沉淀情况时间可以适当延长)
 
  10、将剩余的上清液与沉淀物重新混匀,吸取约600μL混合液移入SPINFilter中,8000r/min下离心1min。
 
  11、倒掉收集管中的液体,重复上一步操作直至5mL离心管中的液体吸尽。
 
  12、加入已制备好的SEWS-M溶液500μL,用小枪头小心混匀后,8000r/min下离心1min后,弃去收集管中的液体。
 
  13、为更好的去除杂离子,重复第12步,更换为1.5mL离心管。
 
  14、在8000r/min下离心2min,去除残留的SEWS-M溶液,然后更换为干净的1.5mL离心管。(若发现残余溶液较多,可重复此步骤)
 
  15、在室温下,将SPINFilter风干5min。(时间可以更久一些)
 
  16、往SPINFilter加入80μLDES溶液,用小枪头小心使之与BindingMatrix混匀,65℃水浴15min(有利于DNA的溶出)。8000r/min下离心2min,可得到约50μL的DNA溶液。再加入80μLDES溶液重复第16步操作,一共可得到约100μL的DNA溶液。
 
  17、弃去SPINFilter,将提取好的DNA存于-20℃冰箱保存。

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