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使用abcam抗体时有哪些知识点需要我们知道的
发布时间:2021-04-07   点击次数:891次
  如果要用abcam抗体对活细胞进行染色或处理,或者要用抗体进行体内研究,请务必使用不含叠化钠的制备物。这种抗菌剂对大部分生物体都有毒害作用:它会阻断细胞色素电子传递系统。
 
  叠化钠会干扰涉及胺基的所有偶联反应,因此必须在进行偶联反应之前将其去除。完成偶联反应之后,可使用叠化钠保存抗体。另一种可用的抗菌剂是 0.01% 硫柳汞钠(硫柳汞),这种物质不含伯胺。
 
  抗体溶液中的氮化钠可通过渗析或凝胶过滤去除。IgG 的分子量为 150,000 Da(IgM 约为 600,000 Da),叠化钠的分子量为 65 Da。截留分子量为 14,000 Da 的微渗析装置可使叠氮化物顺利扩散出去,而抗体得以保留。
 
  渗析过程在烧杯中(置于磁力搅拌器上,温度保持 4 ℃)进行,每毫升抗体使用至少 1 升预冷的 PBS,搅拌渗析装置 6 小时。更换 PBS 两次,每次更换后均搅拌至少 6 小时。如有可能,所有材料都应灭菌,并且应在无菌条件下处理所得制备物。
 
  反复冻融可能使抗体变性,导致抗体形成聚集体,从而降低其结合能力。
 
  对大部分抗体而言,在 -20 ℃ 下保存就已足够;在 -80 ℃ 下保存并无明显优势。应避免使用无霜冰箱,因为此类冰箱的冻融循环(用于减少霜的形成)正是保存此类抗体需要避免的。
 
  出于相同的原因,应将抗体样品瓶放在冰箱中温度波动小的区域,例如抵靠冰箱背板放置而不是置于冰箱门架上。
 
  有些研究人员向抗体中加入冷冻保护剂甘油(终浓度为 50%)以防止冻融损坏;甘油可将冷凝点降至 -20 ℃ 以下。虽然这种方法可用于多种抗体,但我们仅对少数几种 Abcam 抗体在这种保存条件下的稳定性进行了测试,我们仅担保遵循数据表建议进行保存的抗体的性能。
 
  我们不建议在 -80 ℃ 下保存含甘油的溶液,因为该温度低于甘油的冷凝点。请注意,甘油可能会被细菌污染。如果加入了甘油或任何冷冻保护剂,应当小心操作,确保获得无菌制备物。

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