MPbio土壤提取试剂操作全攻略：从样品裂解到DNA纯化的精准流程
更新时间：2026-02-09 点击次数：59次
在土壤微生物生态学研究中，高质量的DNA提取是后续高通量测序与分子生物学分析的基础。MPbio土壤提取试剂以其高效的裂解能力和优异的腐殖酸去除效果，成为科研人员的首要选择工具。本文将详细解析MPbio土壤提取试剂的标准操作步骤，帮助用户快速掌握从样品处理到DNA纯化的全流程。
一、样品裂解与初步纯化
裂解是提取DNA的第一步，旨在破坏细胞壁和细胞膜，释放出核酸物质。首先，称取0.3g至0.5g土壤样品，置于含有裂解介质E（Lysing Matrix E）的2ml离心管中。加入978μL磷酸钠缓冲液（Sodium Phosphate Buffer）和122μL MT缓冲液，确保管内有足够的空间（约200μL）以便后续操作。将离心管置于涡旋混合仪上，以6m/s的速度震荡30-60秒，使样品与裂解介质充分混合。震荡完成后，在8000r/min转速下离心15分钟，此时土壤颗粒和细胞碎片将沉淀于管底。小心吸取上清液，转移至新的1.5ml离心管中，避免吸入沉淀物。
二、蛋白质沉淀与杂质去除
土壤样品中常含有大量的蛋白质和腐殖酸，这些物质会干扰后续的DNA纯化。向转移后的上清液中加入250μL PPS溶液，手持离心管上下颠倒10次，使溶液充分混匀。混匀后，在8000r/min转速下离心5分钟，此时蛋白质和部分腐殖酸将形成沉淀。再次吸取上清液，转移至5ml离心管中。这一步骤对于去除PCR抑制物至关重要，能显著提高最终DNA产物的纯度。
三、DNA结合与洗涤
DNA的纯化基于硅胶膜吸附原理。向含有上清液的5ml离心管中加入1.0mL Binding Matrix Suspension（结合基质悬浮液），将离心管上下颠倒2分钟，使DNA充分结合到基质上。静置3分钟，等待二氧化硅基质沉淀。去除约500μL上清液后，将剩余的混合液转移至SPIN Filter（自旋过滤器）中，在8000r/min转速下离心1分钟。倒掉收集管中的废液，重复此操作，直至5ml离心管中的液体全部转移完毕。随后，加入500μL SEWS-M溶液，小心混匀后离心1分钟，弃去废液。这一步骤旨在去除残留的盐分和杂质，确保DNA的洁净度。
四、DNA洗脱与保存
DNA洗脱是提取流程的最后一步。将SPIN Filter转移至新的收集管中，加入50-100μL DES溶液（DNA洗脱液）。室温放置1-2分钟，使洗脱液充分浸润硅胶膜。在8000r/min转速下离心1分钟，收集管中的液体即为提取到的DNA溶液。提取完成的DNA应置于-20℃或-80℃冰箱中长期保存，避免反复冻融以保持DNA的完整性。
结语
MPbio土壤提取试剂的操作流程设计科学，通过裂解、沉淀、结合和洗脱四个关键步骤，实现了土壤微生物DNA的高效提取。掌握正确的操作步骤，不仅能获得高纯度的DNA产物，更能为后续的分子生物学实验提供可靠的数据支持。
