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Cisbio激酶、GPCR、代谢、免疫标记试剂HTRF®技术

HTRF®是均相时间分辨荧光技术的简称，HTRF®技术是对TR-FRET技术的进一步改良，提供了更高的灵敏度和稳定性，为法国Cisbio公司的zhuanli技术。

Cisbio Bioassays是一家超过50年历史的生命科学、医疗诊断和药物研发公司，最初在体外诊断方面的成就提供了丰富的免疫化验的经验，这方面的经验与Jean-Marie Lehn 教授（1987年诺贝尔化学奖得主）在稀土荧光特性方面研究合作，造就了如今的HTRF技术。如今，HTRF®在药物发现领域成为了*受欢迎的方法之一。*各大制药企业、药物研究所和新药筛选中心都将HTRF®作为重要的化合物筛选方法进行药物研发。

Cisbio Bioassays公司主要提供基于HTRF®技术的完备整套产品，涉及药物筛选、疾病诊断、免疫学分析等多个方面，包括激酶、GPCR、代谢、免疫标记试剂等。在*高通量筛选领域（HTS），Cisbio公司占据了TR-FRET市场的主导份额。

我们北京诺博莱德科技有限公司作为Cisbio Bioassays公司的经销商为客户提供，正规进口，货期稳定，折扣好的服务标准。

Cisbio Bioassays公司部分产品简介：

HTRF®技术： 免洗的Elisa，传统Elisa的替代技术，跟传统的Elisa有wuyulunbi的优势：

操作非常简单：空板直接加样，加完即可检测。

体系非常稳定：7天之内可随时检测，信号基本不变。

数据客观真实：可有效去除背景荧光，假阳性率、假阴性率低。

HTRF®原理

HTRF®（均相时间分辨荧光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence ）是一种用来检测纯液相体系中待测物的技术。该技术结合了荧光共振能量转移（FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer） 和时间分辨荧光 （TRF, Time-Resolved Fluorescence)）两大技术。

荧光共振能量转移（FRET）

利用两种荧光基团，分别称为能量供体（Donor）和能量受体（Acceptor）。在供体和受体相互靠近时，能量从供体转移到受体上，并使后者发出荧光。

由于受体分子的发射光来自于能量转移，所以在实验中无需包被、无需将未结合与已结合的分子分开，即无需洗涤步骤。

时间分辨荧光（TRF）

利用稀土元素中镧系元素的*性质，其荧光比普通荧光持续时间更长。普通荧光的半衰期为纳秒级，镧系元素的半衰期为毫秒级，有6个数量级的差别。所以在检测时，TRF有一个时间延迟-50微秒，从而使普通背景荧光信号几乎为零。因此TRF的背景非常低，反映样品实际情况。

HTRF®的技术创新点

HTRF®的能量供体是铕（Eu3+）和铽（Tb2+）的穴状化合物（如右图）。在穴状化合物里，Eu和Tb被yongjiu地嵌合在一个笼子中，结构非常稳定，对温度、PH值、金属离子、螯合物等耐受性*。

HTRF®的能量受体为XL665和d2。两者激发波长为620 nm，发射波长为665 nm。XL665是改良过的别藻蓝蛋白（APC），其将APC的亚基偶联，使其不能解离，增加了稳定性。d2是第二代受体，光谱学特征与XL665相同，但分子量较小，约为1KD，可减少空间位阻对实验的可能影响。

HTRF®的操作步骤

HTRF®的操作步骤非常简单，只需要将实验所需试剂加进去，然后孵育、检测即可

HTRF®的数据分析

HTRF®采用了比值法来处理数据，可以去除由于溶液通透率、细胞大小、细胞数量不同引起的误差。

HTRF®的应用范围

G蛋白偶联受体研究：受体第二信使检测  受体配体结合  胞内信号分子检测

激酶活性检测：胞外激酶活性检测 胞内激酶活性检测

生物标志物检测：基于抗体的夹心法和竞争法检测

抗体检测：抗体重链含量测定、抗体轻链含量测定

生物过程分析：GST含量测定、HIS含量测定、CHO宿主蛋白含量测定

免疫过程分析：CD16结合检测、CD32结合检测、CD64结合检测

相互作用分析：蛋白-蛋白、蛋白-多肽、蛋白-DNA、蛋白-RNA

蛋白修饰：蛋白甲基化、蛋白乙酰化、蛋白泛素化、蛋白水解

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