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了解一下abcam抗体防止降解、污染的方法
更新时间:2021-03-17 点击次数:1464次
今天让我们一起来了解一下abcam抗体防止降解、污染的方法,话不多说一起来看看吧。
1、防止降解
抗体试剂稀释至工作浓度后,建议及时使用,不建议对稀释后的抗体进行长时间保存。如果必须保存,建议保存于4℃并于一周以内使用。
一般而言,蛋白质浓度高于1mg/ml时更不容易降解,因此部分抗体试剂中加入了牛血清白蛋白(BSA)作为蛋白质稳定剂来防止降解。加入的蛋白质还能尽可能减少抗体结合到容器壁上造成的损失。
需要注意的是,请勿向将要进行偶联的抗体中加入蛋白质稳定剂,因为蛋白质稳定剂会与抗体竞争,降低偶联效率。
2、防止污染
为了防止微生物污染,可将*作为抗菌剂加入抗体工作液中,保持终浓度为0.02%(w/v)。Abcam的多款抗体中都含有*,浓度范围为0.02%-0.05%。抗体数据表的保存缓冲液部分对此有说明。
此外,如果要对活细胞进行染色或处理,或进行体内研究时,请务必使用不含*的试剂。抗菌剂会阻断细胞色素电子传递系统,对大部分生物体都有毒害作用。
高浓度的*会干扰涉及胺基的所有偶联反应,因此必须在进行偶联反应之前将其去除。或可选用0.01%*(硫柳汞),这种抗菌剂不含伯胺。
抗体溶液中的*可通过透析或凝胶过滤去除。IgG的分子量为150,000Da(IgM约为600,000Da),*的分子量为65Da。截留分子量为14,000Da的微透析装置可去除*。
透析过程在烧杯中(置于磁力搅拌器上,温度保持4℃)进行,每毫升抗体使用至少1升预冷的PBS,搅拌透析装置6小时。更换PBS两次,每次更换后均搅拌至少6小时。如有可能,所有材料都应灭菌,并且应在无菌条件下处理所得制备物。


